利用CRISPR/Cas9技术构建Nedd4基因敲除BMDM巨噬细胞系

• 作者: 刘庆军 周虹 张市会
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9技术 Nedd4 基因敲除 巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 265-268
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3514字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2017.04.004

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9技术构建Nedd4基因敲除骨髓衍生巨噬细胞系(BMDM),为研究Nedd4在巨噬细胞中的作用和机制奠定基础.方法 利用在线软件筛选了评分较高的3个针对Nedd4基因的单向导RNA(sgRNA),然后将合成的sgRNA序列插入到PX330质粒中;将重组质粒转入BMDM细胞,通过有限稀释法获取单克隆,采用Western印迹检测单克隆细胞中NEDD4蛋白水平;通过序列测定确认单克隆细胞的DNA序列.结果 通过Western印迹检测获取1株NEDD4蛋白缺失的BMDM细胞;测序结果表明该细胞系中Nedd4基因发生了16 bp的缺失突变.结论 利用CRISPR/Cas9技术构建的Nedd4敲除BMDM细胞系将成为研究Nedd4在巨噬细胞中的功能和机制的有力工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周虹	军事医学科学院野战输血研究所	69	379	10.0	14.0
2	刘庆军	军事医学科学院野战输血研究所	6	10	2.0	2.0
3	张市会	军事医学科学院野战输血研究所	1	1	1.0	1.0