利用CRISPR/Cas9系统构建Prdx6基因敲除的RAW 264.7细胞系

• 作者: 任洪林 全芷仪 卢士英 周玉 常恒祯 常江 张士军 李兆辉 李岩松 柳增善 水一鸣 王路鹿 翟菲菲 胡盼 鞠丹迪
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/Cas9 RAW264.7 Prdx6 移码突变 布鲁菌
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 分类号: Q789|S852.614
• 字数: 3445字
• 语种: 中文

摘要

利用CRISPR/Cas9系统构建敲除Prdx6基因的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,为探讨Prdx6与布鲁菌感染及胞内寄生的关系构建细胞模型.针对Prdx6基因的第1外显子设计sgRNA,构建重组表达载体Prdx6-pX459-sgRNA,将重组质粒转染RAW264.7细胞,嘌呤霉素初步筛选.单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定.结果表明,在敲除细胞株基因组中存在碱基缺失,导致移码突变.说明成功获得敲除Prdx6基因的RAW264.7细胞系.