应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因

• 作者: 吴旭东 张娜 张沛涛 杨冰 楚晓文 王玺 白向阳 赵秀娟 陈万标
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 横纹肌瘤 p21 基因敲除 CRISPR/Cas9 慢病毒
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 1190-1194
• 页数: 5页
• 分类号: R73|R349.64
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20160731

摘要

目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR（RT-qPCR）及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达，针对p21基因作用的功能域，设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA（sgRNA），克隆入lentiCRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞，使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选，显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白，利用RT-qPCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lentiCRISPR v2-sgRNA重组慢病毒质粒。与对照组相比，筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞，应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株，为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张娜	天津医科大学生物医学工程与技术学院	42	161	6.0	10.0
2	赵秀娟	天津医科大学基础医学院	13	62	5.0	7.0
3	吴旭东	天津医科大学基础医学院	4	8	1.0	2.0
4	杨冰	天津医科大学基础医学院	11	8	2.0	2.0
5	陈万标	天津医科大学生物医学工程与技术学院	1	1	1.0	1.0
6	张沛涛	天津医科大学基础医学院	2	1	1.0	1.0
7	白向阳		1	1	1.0	1.0