应用CRISPR/Cas9技术构建MAVS基因敲除的ZR-751乳腺癌细胞株

• 作者: 何湘 张艳红 李凤 耿晋 钟辉 魏从文
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 线粒体抗病毒信号蛋白 CRISPR/Cas9系统 基因敲除 乳腺肿瘤 嘌呤霉素
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 567-571
• 页数: 5页
• 分类号: R737.9
• 字数: 3707字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2017.07.004

摘要

目的 运用成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑技术,构建线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)基因敲除的ZR-751乳腺癌细胞株,研究MAVS对细胞生长的影响.方法 针对MAVS基因第一外显子设计小向导RNA(sgRNA),构建pX459-sgRNA重组质粒.然后利用嘌呤霉素筛选ZR-751 MAVS基因敲除的阳性克隆,Western印迹检测MAVS基因敲除情况,提取克隆基因组进行测序鉴定.平板克隆实验检测MAVS被敲除后对细胞增殖的影响,再利用MTS实验检测在DFX培养基刺激下,MAVS对细胞死亡的影响.结果 Western印迹结果说明ZR-751细胞株内MAVS已完全敲除;且在凋亡诱导剂DFX刺激下,MAVS被敲除后促进细胞增殖.结论 利用CRISPR/Cas9系统成功构建了MAVS基因敲除的ZR-751乳腺癌细胞株,初步实验提示MAVS抑制乳腺癌细胞生长,为后续研究MAVS在肿瘤中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张艳红	军事医学科学院生物工程研究所	25	61	4.0	6.0
2	钟辉	军事医学科学院生物工程研究所	47	246	8.0	14.0
3	何湘	军事医学科学院生物工程研究所	13	48	4.0	6.0
4	魏从文	军事医学科学院生物工程研究所	9	12	2.0	2.0
5	耿晋	安徽大学健康科学研究院	3	2	1.0	1.0
7	李凤	安徽大学健康科学研究院	1	1	1.0	1.0