利用CRISPR/Cas9技术建立PTEN敲除的人子宫内膜腺癌细胞模型及其功能研究

• 作者: 关奕 关爱伟 冯艳玲 宋晓宇 曹流 李宇恒 邓诚思
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: PTEN CRISPR/Cas9 细胞自噬
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 582-585
• 页数: 4页
• 分类号: Q28
• 字数: 3059字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258-4646.2020.07.002

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9技术构建靶向PTEN的基因编辑质粒,构建PTEN稳定敲除的人子宫内膜腺癌细胞株KLE,并初步探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响.方法 设计靶向人PTEN基因的sgRNA序列,构建puro-cas9-PTEN-sgRNA质粒,测序验证;将重组质粒转染人子宫内膜腺癌细胞KLE,嘌呤霉素筛选获得PTEN稳定敲除细胞株;用T7E1酶切实验检测切割效率,Western blotting检测PTEN的蛋白表达水平,并检测细胞自噬相关因子LC3、P62的表达水平,检测细胞活性,探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞自噬的调控作用.结果 CRISPR/Cas9系统对KLE细胞基因组中的PTEN进行了切割,并在同源重组时发生了碱基错配,PTEN被成功敲除;PTEN敲除降低了细胞自噬相关因子LC3Ⅰ型向Ⅱ型转化,增加了P62的累积.PTEN敲除的细胞活性增强.结论 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人子宫内膜腺癌细胞中成功敲除PTEN,抑制了人子宫内膜腺癌细胞的自噬水平,为后续研究提供了细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋晓宇	中国医科大学转化医学研究院	27	50	4.0	5.0
2	关奕	中国医科大学转化医学研究院	2	0	0.0	0.0
3	曹流	中国医科大学转化医学研究院	10	5	1.0	2.0
4	冯艳玲	中国医科大学转化医学研究院	4	5	1.0	2.0
5	李宇恒	中国医科大学转化医学研究院	1	0	0.0	0.0
6	邓诚思	中国医科大学转化医学研究院	1	0	0.0	0.0
7	关爱伟	中国医科大学转化医学研究院	1	0	0.0	0.0