利用CRISPR/Cas9系统构建HeLa细胞Cdc25C基因敲除稳定细胞株

• 作者: 刘萱 姚叶豹 曹诚 王广菲 董钦才
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 Cdc25C HeLa细胞 细胞周期
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 359-362
• 页数: 4页
• 分类号: R737.33
• 字数: 3063字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2017.05.007

摘要

目的 使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类宫颈癌细胞HeLa中的细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cycle 25 homolog C,Cdc25C)基因,构建Cdc25C基因稳定敲除细胞株.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性识别Cdc25C基因第一外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),构建真核重组表达质粒.测序鉴定后,将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选稳定敲除Cdc25C基因细胞株,再用免疫印迹方法鉴定细胞Cdc25C敲除效果.最后用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响.结果 筛选出稳定敲除Cdc25C基因细胞株,且Cdc25C敲除显著影响G2/M期进程.结论 利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源Cdc25C基因敲除细胞株,为研究Cdc25C在细胞周期进程的功能以及相关癌症的发生奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹诚	军事医学科学院生物工程研究所	112	536	10.0	19.0
2	刘萱	军事医学科学院生物工程研究所	42	105	6.0	8.0
3	王广菲	军事医学科学院生物工程研究所	3	2	1.0	1.0
4	姚叶豹	军事医学科学院生物工程研究所	1	2	1.0	1.0
5	董钦才	军事医学科学院生物工程研究所	2	2	1.0	1.0