CRISPR/Cas9慢病毒系统敲除胰岛β细胞PKA C-α的研究

• 作者: 万毅虹 何士俊 刘叔文 刘静文 姚新刚 章嘉雯 蔡秀潮
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: CRISPR/cas9系统 PKAC-α INS-1细胞 稳定细胞株
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 基因编辑专题
• 页码范围: 102-109
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0534

摘要

利用CRISPR/cas9系统建立稳定敲除PKA C-α基因的INS-1细胞株,研究PKA C-α在胰岛β细胞中的功能.设计2个长25 bp且分别靶向PKA C-α基因的exon 5和exon 7的sgRNA,将其克隆至LentiCRISPRv2-sgRNA质粒并转染至293T细胞中制备sgRNA-Cas9慢病毒,慢病毒感染INS-1细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞并采用有限稀释法筛选单克隆细胞,Western blotting印记法检测单克隆细胞中PKA C-α蛋白的表达水平,测序确认单克隆细胞中PKA C-α基因的突变位点.WB实验证实靶向Exon 5的sgRNA可成功敲除PKA C-α基因,得到稳定敲除PKA C-α基因的细胞株,测序结果表明该细胞株的PKA C-α基因发生1 bp碱基插入突变,并且敲除PKA C-α基因的INS-1细胞胰岛素分泌能力下降.本实验利用CRISPR/Cas9系统成功敲除INS-1细胞中的PKA C-α基因,为研究PKA C-α在胰岛β细胞中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何士俊	广东省新药筛选重点实验室南方医科大学药学院	1	0	0.0	0.0
2	万毅虹	广东省新药筛选重点实验室南方医科大学药学院	1	0	0.0	0.0
3	章嘉雯	广东省新药筛选重点实验室南方医科大学药学院	1	0	0.0	0.0
4	蔡秀潮	广东省新药筛选重点实验室南方医科大学药学院	1	0	0.0	0.0
5	刘静文	广东省新药筛选重点实验室南方医科大学药学院	1	0	0.0	0.0
6	刘叔文	广东省新药筛选重点实验室南方医科大学药学院	1	0	0.0	0.0