CRISPR/Cas9建立IL-12p35基因敲除大鼠C6细胞系表达研究

• 作者: 孙瑾 张俊卿 杨芳裕 田新华 董桂江 黄延林
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 C6 IL-12p35 慢病毒源性载体
• 年，卷（期）: 2019,（20）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 2452-2456
• 页数: 5页
• 分类号: R730.3
• 字数: 4127字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.20.004

摘要

目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除大鼠C6细胞系的IL-12p35基因,构建IL-12p35基因稳定敲除细胞株.方法:构建Lenti-sgRNA-EGFP质粒CRISPR/Cas9系统的Cas9核酸内切酶基因,慢病毒感染C6细胞后进行MTT[3-(4,5-Dimeth-ylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]检测及PI-FACS(Facial Action Coding System)细胞周期检测.结果:针对IL-12p35基因的KO1、KO2、KO3三个靶点,进行慢病毒转染,转染效率均大于80％.酶切前后靶点活性均下调,免疫印迹验证C6细胞中靶点有效性.MTT检测结果IL-12p35基因敲除后于第5天细胞增殖倍数明显降低.IL-12p35基因敲除后显著影响细胞周期G1期,G2/M期.结论:本研究构建IL-12p35基因的CRISPR/Cas9敲除系统,获得稳定的IL-12p35基因敲除细胞株,为后期IL-12p35与胶质瘤细胞的发生、发展机制方面研究提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨芳裕	厦门大学附属中山医院神经外科	19	60	4.0	7.0
2	田新华	厦门大学附属中山医院神经外科	59	195	7.0	11.0
3	黄延林	厦门大学附属中山医院神经外科	28	83	6.0	7.0
4	孙瑾	厦门大学附属中山医院神经外科	19	66	5.0	7.0
5	董桂江	厦门大学附属中山医院神经外科	6	4	1.0	1.0
6	张俊卿	厦门大学附属中山医院神经外科	25	68	5.0	7.0