建立CRISPR/Cas9慢病毒系统高效敲除人源AIP1基因

• 作者: 张继勤 李锦辉 王敏 纪卫东 苏甲林 阙彪
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: CRISPR/Cas9 慢病毒 AIP1 稳定细胞株
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 219-224
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.032

摘要

旨在构建AIP1基因CRISPR/Cas9敲除体系，获得高效、稳定、永久性AIP1敲除的人胚肾细胞株（293T）。针对AIP1的外显子设计3个20 bp的sgRNA（sp1、sp2和sp3）。与PX458载体连接，构建PX458-sgRNA敲除表达载体。T7E1实验评估敲除效率。将敲除效率最高的sgRNA与lentiCRISPRv2慢病毒载体连接，构建lentiCRISPRv2-sgRNA敲除表达载体，将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中，收集病毒上清液转染293T细胞。对敲除成功的293T细胞通过有限稀释法构建敲除AIP1基因的稳定细胞株。Western blot测定转染后293T细胞中AIP1蛋白的表达量。结果显示，测序证实AIP1的3个靶序列分别正确插入PX458表达载体中，T7E1实验证实AIP1sgRNAsp2靶向敲除效率最高；成功构建lentiCRISPRv2-sgRNAsp2 AIP1敲除表达载体，并包装病毒，感染293T细胞；Western blot证实获得稳定的AIP1基因表达缺失的293T细胞株。建立了能稳定敲除AIP1基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统，成功获得AIP1敲除的293T稳定细胞株。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	纪卫东		15	25	3.0	4.0
2	王敏		64	506	13.0	19.0
3	苏甲林	广州医科大学附属第一医院广东省泌尿外科重点实验室	1	5	1.0	1.0
4	阙彪	广州医科大学附属第一医院广东省泌尿外科重点实验室	1	5	1.0	1.0
5	张继勤		2	6	1.0	2.0
6	李锦辉	广州医科大学附属第一医院广东省泌尿外科重点实验室	1	5	1.0	1.0