通过CRISPR/Cas9系统敲除人源PDE10A基因

• 作者: 梁振伟 沈岩 许琪 饶书权
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: PDE10A CRISPR/Cas9 稳定细胞株
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 439-443
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 2658字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立敲除基因组中PDE10A基因的CRISPR/Cas9系统.方法 设计3个长20bp的sgRNA,分别靶向PDE10A的exon 6、exon 7和exon 11.化学合成sgRNA寡核苷酸序列,并克隆进PX330质粒中.将克隆正确的质粒PX330-sgRNA转染至HEK293T细胞中,提取基因组DNA并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增,再通过SURVEYOR分析和一代测序对敲除效率进行检测.最后采用有限稀释法挑选稳定敲除PDE10A的HEK 293T细胞株.结果 目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入PX330质粒中且序列正确;靶向Exon 7的sgRNA可成功敲除PDE10A,且敲除效率高达31.4％;稳定敲除PDE10A的细胞株筛选成功,可导致2 bp缺失.结论 PDE10A基因CRISPR/Cas9敲除系统构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许琪	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	24	72	5.0	7.0
2	沈岩	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	20	72	5.0	7.0
3	梁振伟	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	1	4	1.0	1.0
4	饶书权	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	2	17	2.0	2.0