利用CRISPR/Cas9技术构建ATF4基因敲除的HepG2细胞株

• 作者: 易桥勇 李天宇 王秋雁
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: ATF4 CRSPR/Cas9系统 基因敲除 肝癌
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 603-607
• 页数: 5页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4373字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2018.05.005

摘要

目的:运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立ATF4基因敲除的HepG2细胞株.方法:针对ATF4基因作用的功能区域,设计靶向ATF4基因Exon 1(外显子1)和Exon 2(外显子2)的两对gRNA.构建PX459-ATF4-gRNA重组质粒并转化DH5α感受态细胞,筛选出重组子后进行测序,通过测序验证所设计的gRNA的有效性.将PX459-ATF4-gRNA质粒转染到HepG2细胞中,挑选单克隆细胞,提取DNA,进行PCR检测与基因测序,获得敲除ATF4基因的细胞株.通过western blotting检测筛选出来的HepG2细胞ATF4基因的敲除效果.结果:菌落PCR与菌液测序结果显示PX459-ATF4-gRNA载体构建成功;PCR扩增电泳与基因测序检测显示成功构建成了ATF4基因敲除的HepG2细胞;western blotting检测结果显示单克隆2号ATF4蛋白不表达,单克隆3号仍表达ATF4蛋白.结论:成功构建ATF4基因敲除的HepG2细胞,为后续ATF4在肝癌中的作用机制和功能研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王秋雁	广西医科大学基础医学院	21	106	6.0	9.0
2	李天宇		7	18	2.0	4.0
3	易桥勇	广西医科大学基础医学院	1	0	0.0	0.0