利用CRISPR/Cas9技术敲除小鼠ES细胞H2-K1基因

• 作者: 刘建中 李亮平 李蔚然 陈瑞俊 黄乙涓
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: H2-K1基因 CRISPR/Cas9技术 mES细胞 基因敲除
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 页码范围: 5-12
• 页数: 8页
• 分类号: R392
• 字数: 7120字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13471/j.cnki.acta.snus.2017.02.002

摘要

利用CRISPR/Cas9和ES细胞技术,在小鼠ES细胞株上敲除小鼠H2-K1基因,为研发MHC Ⅰ类基因人源化小鼠打下基础.设计了两个单向导RNA (single guide RNA,sgRNA),分别靶向H2-K1基因的外显子2和外显子3.以pX330质粒为骨架构建表达sgRNA的打靶载体.用电穿孔转染法将构建好的质粒以及pSUPER-puro共同导入小鼠ES细胞中,实现基因敲除.在嘌呤霉素筛选后,利用PCR初步检测靶基因的敲除情况,再通过测序以及流式细胞分析确定敲除H2-K1基因的小鼠ES细胞.结果显示:利用CRISPR/Cas9技术,小鼠ES细胞的H2-K1基因被成功敲除,通过PCR检测到4个克隆为H2-K1单等位基因敲除(19.0％),2个克隆为H2-K1双等位基因敲除(9.5％).经过测序以及流式细胞分析,2株小鼠ES细胞被确认为H2-K1双等位基因敲除.本研究利用CRISPR/Cas9技术得到H2-K1基因敲除的小鼠ES细胞株,为MHC Ⅰ类基因的敲除和置换提供了参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘建中	中山大学中山医学院生物学教研室	18	161	6.0	12.0
2	李亮平	中山大学中山医学院生物学教研室	12	50	4.0	7.0
6	黄乙涓	中山大学中山医学院生物学教研室	4	1	1.0	1.0
7	李蔚然	中山大学中山医学院生物学教研室	2	7	1.0	2.0
8	陈瑞俊	中山大学中山医学院生物学教研室	1	0	0.0	0.0