利用CRISPR／Cas9系统构建H22细胞GP73基因敲除稳定株及功能鉴定

• 作者: 杨晓莉 梁慧 王贝晗 钟辉 陈健康 魏从文
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9系统 GP73 基因敲除 癌,肝细胞
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 549-553
• 页数: 5页
• 分类号: R735.7
• 字数: 3712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.07.004

摘要

目的：利用CRISPR／Cas9基因编辑系统敲除小鼠源肝癌细胞H22中的GP73基因，构建H22细胞GP73基因敲除的稳定细胞株。方法根据CRISPR／Cas9靶点设计原则，设计2条特异性识别GP73基因启动子的上下游sgRNA，利用载体pX459质粒，构建2对重组真核表达质粒。经酶切和测序鉴定后，将重组质粒转染至H22细胞内，使用嘌罗霉素加压筛选稳定敲除GP73的H22细胞株，利用免疫印迹检测重组质粒对内源GP73的敲除效果。MTT实验检测GP73被敲除后对细胞增殖能力的影响，再利用划痕实验检测细胞的迁移能力。结果免疫印迹结果说明敲除GP73基因的小鼠源H22细胞株内无GP73蛋白的表达；并且GP73被敲除后，H22细胞的增殖能力和迁移能力减慢。结论通过CRISPR／Cas9系统获得了靶向GP73基因的重组质粒，并且筛选出了稳定干扰GP73表达的细胞株，从而为探讨GP73在肝癌发生中的作用奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟辉	军事医学科学院生物工程研究所	47	246	8.0	14.0
2	杨晓莉	安徽医科大学武警总医院临床学院	48	160	6.0	10.0
4	王贝晗		24	146	6.0	11.0
5	梁慧		45	271	7.0	15.0
6	魏从文	军事医学科学院生物工程研究所	9	12	2.0	2.0
7	陈健康	安徽医科大学武警总医院临床学院	1	1	1.0	1.0