利用CRISPR/CAS9技术构建山羊乳腺上皮细胞TPH1基因敲除细胞系

• 作者: 张志飞 柏亦陈 田慧彬 罗军 郑惠玲 骆琛
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/CAS9 色氨酸羟化酶(TPH) 基因敲除 山羊乳腺上皮细胞(GMEC)
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1431-1439
• 页数: 9页
• 分类号: S827
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.08.016

摘要

五羟色胺(5-hydroxytryphtamine,5-HT)是机体重要的单胺类神经递质,广泛分布于动物体各组织器官并参与机体多种生理功能.色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)1是5-HT合成的限速酶,在5-HT调控机体代谢过程中起关键作用.本研究旨在利用CRISPR/CAS9技术建立稳定敲除TPH1基因的山羊(Capra hircus)乳腺上皮细胞系,为研究山羊乳腺中5-HT调控山羊乳腺上皮细胞(goat mammaryepithelial cells,GMEC)钙离子代谢的分子机理提供实验材料.首先根据GenBank中山羊TPH1基因序列(GenBank No.:102184739),设计靶向TPH1基因第一外显子的单导链RNA (single guide RNA,sgRNA),用pX458和pX459分别构建重组真核表达载体pX458-sgRNA和pX459-sgRNA,将重组质粒转染山羊乳腺上皮细胞,使用嘌呤霉素(1 tg/mL)进行阳性细胞筛选,挑取单克隆细胞进行培养,用Western blot、T7E1酶切、基因组DNA测序等方法鉴定基因敲除效果.结果显示:通过CRISPR/CAS9技术成功在TPH1基因第一外显子打靶产生10bp碱基缺失.本研究成功构建并筛选获得了TPH1基因稳定敲除的单克隆山羊乳腺上皮细胞系,为5-HT调控乳腺生理的功能研究提供了重要材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑惠玲	西北农林科技大学动物科技学院	28	83	5.0	8.0
2	罗军	西北农林科技大学动物科技学院	91	625	13.0	20.0
3	张志飞	西北农林科技大学动物科技学院	4	1	1.0	1.0
4	田慧彬	西北农林科技大学动物科技学院	3	4	1.0	2.0
5	骆琛	西北农林科技大学动物科技学院	1	0	0.0	0.0
6	柏亦陈	西北农林科技大学动物科技学院	1	0	0.0	0.0