利用CRISPR/Cas9技术构建22q-Enh3增强子元件敲除型A549稳定细胞系

• 作者: 俞大伟 孙玉洁 孙鸾 杨楠 杨音 邵立培
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 肺癌 基因敲除 增强子元件
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 63-67
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3415字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2016.02.001

摘要

目的 增强子元件敲除细胞系是探索增强子功能的理想细胞模型,为了探索位于22q12.2肺癌易感染色质区的增强子元件22q-Enh3的生物学功能,建立敲除22q-Enh3增强子元件的纯合细胞系.方法 利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/crispr-associated 9)基因敲除技术在非小细胞肺癌A549细胞系中敲除22q-Enh3增强子,并运用流式细胞术、细胞培养以及PCR技术筛选和鉴定敲除型克隆.结果 我们最终获得了3个敲除增强子元件22q-Enh3的纯合子细胞克隆.结论 本研究为进一步研究22q-Enh3增强子元件的生物学功能提供了细胞模型,并为应用CRISPR/Cas9基因敲除技术建立其他增强子元件敲除型纯合子细胞模型积累了宝贵经验.