利用CRISP R/Cas9技术构建GLUT4基因敲减的A549细胞系

• 作者: 刘佳 张颖 赵平
• 来源期刊: 中南民族大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 GLUT4 葡萄糖摄取
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 133-138
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 4169字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12130/znmdzk.20200205

摘要

目的:为探究GLUT4基因在肺癌细胞中的功能及影响.方法:在GLUT4外显子上设计了4个sgRNAs(S1、S2、S3、S4),分别与PX458载体连接形成重组表达载体后,借助转染试剂lipo3000将表达载体转入生长态势良好的A549细胞中,再利用流式细胞仪分选技术对转入重组载体发出绿色荧光的细胞进行单细胞分选.利用基因组测序筛选突变株,提取突变株的RNA和蛋白,进行Real-time PCR及Western Blot检测敲减效率,并利用激光共聚焦显微术检测突变株葡萄糖摄取量的变化.结果:突变株细胞在mRNA及蛋白水平均表现出GLUT4基因敲减效果,并在葡萄糖摄取上表现出明显的降低趋势.结论:利用CRISPR/Cas9系统成功建立了GLUT4基因敲减A549细胞系.