利用CRISP R/Cas9技术产生肌肉特异表达Cas9的 小鼠胚胎

• 作者: 安铁洙 朴善花 李昊 李松美 王春生 陈胜男
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Rosa26 Cas9 基因编辑 肌肉特异 基因打靶
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 271-277
• 页数: 7页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 5587字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2019.03.001

摘要

目的 通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础.方法 设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将Rosa26 sgRNA与Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通过PCR及测序检测胚胎的编辑情况,同时移植到假孕母鼠体内,待其生产;将同源打靶载体与Rosa26 sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通过PCR检测整合情况.结果 体外酶切实验表明,体外转录的sgRNA与Cas9蛋白联合可对靶位点产生编辑作用;成功构建了肌肉特异性同源打靶载体Donor-SP-px459;通过原核注射获得Rosa26基因编辑胚胎,经移植获得Rosa26基因编辑小鼠;注射同源打靶载体后,成功获得肌肉特异表达Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎.结论 利用CRISPR/Cas9技术,成功获得Rosa26基因编辑胚胎和小鼠,并获得了肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为利用基因打靶构建肌肉特异表达Cas9的小鼠动物模型奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	安铁洙	东北林业大学生命科学学院动物发育研究室	75	199	8.0	10.0
2	王春生	东北林业大学生命科学学院动物发育研究室	61	134	7.0	9.0
3	朴善花	东北林业大学生命科学学院动物发育研究室	53	94	5.0	7.0
4	李昊	东北林业大学生命科学学院动物发育研究室	20	79	5.0	8.0
5	陈胜男	东北林业大学生命科学学院动物发育研究室	4	1	1.0	1.0
6	李松美	东北林业大学生命科学学院动物发育研究室	4	1	1.0	1.0