CRISPR/Cas9系统介导的人乳铁蛋白基因在山羊β-乳球蛋白基因座定点敲入

• 作者: 周鸣鸣 宋绍征 张婷 成勇 潘生强 陆睿
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/Cas9 β-乳球蛋白 人乳铁蛋白 基因打靶 核移植
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 页码范围: 111-119
• 页数: 9页
• 分类号: S857.2+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11841/j.issn.1007-4333.2020.07.11

摘要

为研究山羊乳蛋白基因编辑,实现羊乳“人源化”改造.利用CRISPR/Cas9系统敲除山羊乳中致敏原β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点敲入人乳铁蛋白(hLF)基因.针对山羊BLG基因第一外显予设计构建sgBLG/Cas9表达载体经电转染山羊胎儿成纤维细胞验证其编辑活性;将打靶载体BLC14与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经筛选检测获得BLG-/hLF+打靶细胞株作为供核细胞用于山羊体细胞核移植;通过剖宫产获取克隆胎儿并验证其中靶情况.结果 表明:sgBLG/Cas9编辑山羊BLG位点致突变率约为30％～35％;共筛选72株药物抗性细胞株,其中有37株为基因打靶细胞,打靶效率为51.4％(37/72);挑取形态较好的7株打靶细胞用于核移植,共制备416枚重构胚,移植30只受体山羊;30-35日龄B超诊断有13只受孕,妊娠率为43.3％(13/30);剖宫产获取3只35日龄克隆胎儿均验证为BLG-/hLF+基因型,并建立了BLG-/hLF+靶向性修饰细胞系.因此,利用CRISPR/Cas9系统可以获得BLG基因座定点打靶hLF基因的转基因克隆山羊,该研究为培育羊乳中低致敏原和富含hLF功能营养成分的转基因山羊新品系提供了科学依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周鸣鸣	无锡太湖学院护理学院	14	5	1.0	1.0
2	宋绍征	无锡太湖学院护理学院	8	0	0.0	0.0
3	陆睿	江苏食品药品职业技术学院制药工程学院	2	0	0.0	0.0
4	潘生强	无锡太湖学院护理学院	3	0	0.0	0.0