抗CD52单克隆抗体ADCC转基因测活方法的建立

• 作者: 于传飞 刘春雨 崔永霏 王兰 肖启东 黄璟
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 抗CD52单克隆抗体 单克隆抗体 抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用 生物学活性 报告基因
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 27-33
• 页数: 7页
• 分类号: R378
• 字数: 4643字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2019.05.005

摘要

目的 建立转基因细胞法测定抗CD52单克隆抗体(单抗)的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法.方法 ①以Ramos细胞系作为靶细胞,以Jurkat-hFcγRⅢa/FcεRIγ-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,通过荧光素酶检测系统(Bright-GloTM luciferase Assay System)建立抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测方法;②对靶细胞、量效范围、效靶比及诱导时间进行优化并进行方法学验证;③研究建立的方法应用于对不同抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测.结果 建立抗CD52单抗的AD-CC生物学活性检测方法,抗CD52单抗在该方法中存在量效关系,符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D;经优化后确定抗体量效范围为起始质量浓度360μg/mL,4倍系列稀释9个稀释度;效靶比为3:1,诱导时间为6.0 h;该方法具有良好的专属性;4个不同稀释组回收率样品经3次测定,相对效价分别为(45.58±4.67)％、(71.61±9.45)％、(122.92±7.92)％和(149.94±14.58)％;对应的回收率分别为(91.16±9.34)％、(95.49±12.60)％、(98.34±6.34)％和(99.96±9.72)％,上述结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均小于15％;且该方法也适用于不同抗CD52单抗的ADCC效应评价.结论 利用转基因细胞法成功建立了抗CD52单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD52单抗的ADCC生物学活性.