抑制miR-30a/HMGA2介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗诱导的细胞凋亡的作用

• 作者: 严明明 倪江东 夏勤 李文钊 潘柏祺 黄俊
• 来源期刊: 中南大学学报（医学版）
• 关键词: 微小RNA-30a 自噬 凋亡 骨肉瘤
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 757-766
• 页数: 10页
• 字数: 7484字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11817/j.issn.1672-7347.2019.180449

摘要

目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)-30a/高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗(以下简称化疗)药物诱导的细胞凋亡的影响.方法:随机选取30例经化疗药物治疗后表现为化疗敏感和化疗抵抗的骨肉瘤患者组织,分为化疗敏感组(n=15)和化疗抵抗组(n=15),采用real-time PCR检测两组中miR-30a和HMGA2的mRNA表达水平,以及骨肉瘤细胞U2-OS经不同浓度的化疗药物(顺铂、阿霉素、氨甲蝶呤)处理后miR-30a的mRNA表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞内自噬相关因子Beclin 1,自噬微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)、自噬抑制因子P62的表达情况.在骨肉瘤细胞U2-OS中转染miR-30a模拟物和抑制剂,构建miR-30a高表达组、低表达组和对照组,采用蛋白质印迹法检测经过顺铂和阿霉素处理后上述3组细胞内Beclin 1,LC3B和P62的表达情况;采用单丹磺酰尸胺(monodansylcada,MDC)染色法检测细胞内自噬水平,ROS荧光探针-二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)检测细胞内ROS水平,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡程度,线粒体膜电位荧光探针JC-1检测细胞线粒体氧化损伤程度;采用双荧光素酶法检测miR-30a与HMGA2的相互作用,同时通过转染HMGA2模拟物和HMGA2-shRNA干扰质粒载体,构建HMGA2高表达组、低表达组和对照组,采用蛋白质印迹法检测经过顺铂和阿霉素处理后上述3组细胞内Beclin1,LC3B和P62的表达情况.结果:化疗抵抗组中miR-30a的mRNA水平显著低于化疗敏感组(P＜0.05),HMGA2的表达与miR-30a相反(均P＜0.05).在相对低浓度(5μml/L)的化疗药物刺激下,骨肉瘤细胞U2-OS内的miR-30a mRNA表达下调,Beclin 1和LC3B均显著上调(均P＜0.01),P62显著下调(P＜0.01).在miR-30a高表达组中,与对照组相比,Beclin 1和LC3B的表达水平与miR-30a明显下降(P＜0.05),P62的表达水平明显升高(P＜0.05),在miR-30a低表达组中则相反;在经过化疗药物处理后的miR-30a高表达组中,细胞自噬水平更低,细胞存活率更低,ROS水平更高,线粒体氧化损伤程度更高,细胞凋亡水平更高(均P＜0.05),miR-30a低表达组则相反(均P＜0.05).双荧光素酶报告基因检测验证了miR-30a与HMGA2的靶向互补配对关系;与对照组相比,HMGA2高表达组中Beclin 1和LC3B的表达水平与HMGA2明显升高(P＜0.05),P62的表达水平明显下降(P＜0.05),在HMGA2低表达组中则相反.结论:积极发挥miR-30a/HMGA2抑制骨肉瘤细胞自噬的功能,能够破坏细胞应对ROS介导的自噬与凋亡的平衡,增强化疗药物对细胞的杀伤作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪江东	中南大学湘雅二医院骨科	76	381	11.0	15.0
2	严明明	中南大学湘雅二医院骨科	3	18	2.0	3.0
3	黄俊	中南大学湘雅二医院骨科	10	72	4.0	8.0
4	夏勤	中南大学湘雅二医院骨科	1	1	1.0	1.0
5	潘柏祺	中南大学湘雅二医院骨科	1	1	1.0	1.0
6	李文钊	中南大学湘雅二医院骨科	1	1	1.0	1.0