牛分枝杆菌PtpA蛋白对NF-κB信号通路的调控机制

• 作者: 平晓坤 窦燚萍 罗静龙 贾坤 赵琰
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛结核病 牛分枝杆菌 PtpA蛋白 NF-κB信号通路 细胞因子 免疫应答
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S852.618
• 字数: 4644字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201809022

摘要

[目的]研究牛分枝杆菌Mycobacterium bovis PtpA蛋白对免疫应答相关的NF-κB信号通路的影响,以揭示PtpA蛋白在机体免疫应答中的作用.[方法]构建PtpA基因真核表达载体FLAG-PtpA,并将其转染到HEK293T中,进行SDS-PAGE分析及Western blot检测.激活NF-κB信号通路后,通过双荧光素酶试验和qPCR方法探究PtpA蛋白对NF-κB信号通路的影响.[结果]成功构建PtpA基因真核表达载体FLAG-PtpA,转染HEK293T后经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为22000处可见特异性蛋白条带.Western blot结果显示,表达产物可与一抗特异性结合,证明该蛋白是PtpA蛋白.双荧光素酶试验中,转染2～24 h,试验组与对照组萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的相对荧光强度的比值差异显著(P<0.05);转染2 h后,对照组萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的相对荧光值是试验组的2.93倍,说明PtpA蛋白对NF-κB信号通路激活早期具有显著的抑制作用.qPCR结果显示,转染2 h后,对照组的IL-6、GM-CSF、BIRC-2和BIRC-3的表达量分别是试验组的3.93、3.42、2.17和2.30倍(P<0.01);转染4 h后,对照组的IL-6、GM-CSF、BIRC-2和BIRC-3的表达量分别是试验组的4.26、3.93、2.36和2.50倍(P<0.01),说明PtpA蛋白对NF-κB信号通路相关的细胞因子(IL-6、GM-CSF、BIRC-2、BIRC-3)在免疫早期具有显著抑制作用.[结论]qPCR结果与双荧光素酶试验结果一致,表明牛分枝杆菌PtpA蛋白对NF-κB信号通路的影响主要发生在早期.本研究为后续研究有效的结核病防控药物提供了理论基础.