树鼩Mfsd2a基因的克隆分析和不同组织表达量的检测

• 作者: 仝品芬 代解杰 匡德宣 孙晓梅 李娜 王文广 罕园园 陆彩霞
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 树鼩 主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a) 克隆 分析 表达
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 178-186
• 页数: 9页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4284字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.03.002

摘要

目的 对树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a)基因进行克隆、测序和生物信息学分析,并定量检测其组织表达量.方法 从树鼩脑和脊髓中提取总RNA,RT-PCR扩增Mfsd2a基因片段,测序后利用生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白的结构和理化性质进行分析;以树鼩β-actin为内参,qPCR检测树鼩Mfsd2a基因在不同组织中的表达情况.结果 克隆获得Mfsd2a基因片段全长1796 bp,与NCBI上公布的树鼩Mfsd2a基因预测序列高度一致,比对显示其与MFS转运蛋白超家族同源.其编码区全长1464 bp,编码488个氨基酸.预测结果显示树鼩Mfsd2a蛋白具有明显的疏水性区域,无信号肽,二级结构元件由α螺旋、β折叠、无规卷曲和延伸链组成.OCTOPUS分析发现Mfsd2a存在12个跨膜结构,修饰结构预测发现Mfsd2a蛋白存在两处N糖基化位点,亚细胞定位发现其可能主要分布于细胞膜和内质网.qPCR检测树鼩不同组织的Mfsd2a表达,结果显示各组织均有表达,在大脑、脊髓中的表达水平相对较高.结论 成功克隆了树鼩Mfsd2a基因,建立了该基因表达定量检测方法,为今后利用树鼩神经系统疾病模型深入开展Mfsd2a基因功能研究提供了理论和技术支持.