基于单个外周血浆细胞技术筛选MRSA人源性单克隆抗体的实验研究

• 作者: 刘圆圆 宋振 廖化新 张怡 敬海明 曾浩 王孝丽 邹全明
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 治疗性 人源性单克隆抗体 筛选与鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 254-261
• 页数: 8页
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20190041

摘要

目的 建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)人源性单克隆抗体筛选方法.方法 从52份重组MRSA多价亚单位疫苗的Ⅰ期临床研究受试者血液样本中筛选出抗体滴度高的血样,利用流式细胞术分选其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中浆细胞,以mRNA为模板PCR扩增抗体重链、轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR分别将将抗体重链、轻链可变区基因与CMV启动子、人恒定区及多聚A尾连接,构建成单克隆抗体线性表达载体,PEI瞬时转染293T细胞进行抗体表达.结果 流式细胞术分选出1 120个浆细胞,筛选出了39个针对MRSA 5种保护性抗原α-溶血素(Hla)、铁离子表面决定蛋白B(Isd B)、金葡菌蛋白A(SpA5)、肠毒素B(SEB)及锰离子结合蛋白C(Mnt C)的人源性单克隆抗体,ELISA结果显示抗体能与抗原蛋白结合.结论 通过单个外周血浆细胞技术,成功筛选出了能够与抗原结合的MRSA人源性单克隆抗体,为研究MRSA治疗性人源性抗体奠定了良好基础.