编码Ag85A基因突变体的设计与合成

• 作者: 吕昌龙 翟景波 翟郑 赵乐恒
• 来源期刊: 微生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Ag85A PCR 基因突变体 基因合成
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 56-64
• 页数: 9页
• 分类号: Q933
• 字数: 5369字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-7021.2019.02.009

摘要

自行设计和合成可转录mRNA不能翻译功能性蛋白分子的全长Ag85A编码基因突变体(Ag85A-M),克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,用于后续制备Ag85A-M疫苗,研究双股Ag85 DAN疫苗是否能通过RNA传感器提呈抗原信息,诱导固有和适应性免疫应答.设计Ag85A-M基因,将编码Ag85A基因(891 bp)中的第114位和230位的碱基C突变为G,使之含有TAG和TGA双重翻译终止子.合成Ag85A(M)全基因片段,利用普通PCR方法按照设计将Ag85A(M)全基因序列分别拆分成332 bp(A)、332 bp(B)、264 bp(C)三个小片段和488 bp(D)、423 bp(E)两个小片段进行扩增合成.构建pIRES2-EGFP-Ag85A(M)载体,将Ag85A(M)全长基因片段通过pIRES2-EGFP载体多克隆位点(multiple clone site,MCS)中双酶切位点EcoR I/BamH I插入载体,再经双酶切和基因测序鉴定,DC2.4中基因表达确认.结果显示,采用普通PCR法分段扩增合成获得与预先设计的长度一致的A、B、C、D和E小片段,合成的Ag85A-M的全部序列(891 bp)、突变位置和碱基正确.三片段拆分(A、B和C小片段)阳性克隆率平均值为87.67％,基因保真度为90.33％.二片段拆分(D和E小片段)阳性克隆率平均值为81.5％,基因保真度为23％.结果表明,本研究获得了可用于后续研究的含有114和230位点突变的全长Ag85A-M DNA片段,三片段基因拆分方法获得的332 bp及以下片段PCR法合成保真度显著高于二片段拆分方法获得的423 bp及以上片段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕昌龙	内蒙古民族大学布鲁氏菌病研究所	74	495	12.0	18.0
7	赵乐恒	内蒙古民族大学布鲁氏菌病研究所	4	5	1.0	2.0
11	翟郑	内蒙古民族大学布鲁氏菌病研究所	1	0	0.0	0.0