胎儿弯曲菌PCR检测方法的建立及其初步应用

• 作者: 唐海燕 唐虹 孔科 徐仲兰 焦新安 范正杨 黄金林
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胎儿弯曲菌 PCR 快速检测
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 694-698
• 页数: 5页
• 分类号: R378.99
• 字数: 4308字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.130

摘要

目的 建立胎儿弯曲菌PCR快速检测方法.方法 以胎儿弯曲菌表面蛋白基因sapB2为靶基因,应用软件设计特异性引物,通过反应条件的优化,引物敏感性、特异性和灵敏度的试验以及模拟污染样品的检测,建立胎儿弯曲菌PCR快速检测方法并应用于临床样品检测.结果 该研究建立的PCR方法能特异性扩增胎儿弯曲菌sapB2(789 bp)基因片段,空肠弯曲菌、结肠弯曲菌、唾液弯曲菌和豚肠弯曲菌以及其他17株参考菌如大肠杆菌、沙门菌等均未扩增出条带;胎儿弯曲菌纯培养物最低可检出0.23 pg/μL的DNA,模拟感染样品污水和奶牛粪便样品中胎儿弯曲菌的最低检出量分别为0.9 CFU/mL和20 CFU/g;临床样品检测中,400份奶牛肛门擦拭样品和125份产妇阴道擦拭样品的PCR检测结果均为胎儿弯曲菌阴性,与传统的平板分离方法同步检测结果一致.结论 所建立的胎儿弯曲菌PCR检测方法具有特异性强、敏感度高、简便快速等特点,为胎儿弯曲菌的快速检测提供了技术支持,对识别该菌株的暴发流行,相关疾病的诊断和控制具有重要意义.