弯曲菌荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: 张小燕 朱佳琪 焦新安 黄金林
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 弯曲菌 16S rRNA基因 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 试 验 研 究
• 页码范围: 70-74
• 页数: 5页
• 分类号: S8562.613|TS207.4
• 字数: 3667字
• 语种: 中文

摘要

根据弯曲菌16S rRNA基因的靶序列设计特异性引物和探针，对反应条件和试剂浓度进行优化，建立了快速检测鸡肉中弯曲菌的荧光定量PCR方法，并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。该方法除了对弯曲菌有扩增曲线外，对其他常见食源性病原菌均未有扩增曲线，具有较好的特异性；弯曲菌的最低检测限为10 CFU/mL；重复性实验获得标准曲线相关系数为R2=0.999，批内可重复性变异系数在0.12%-2.1%之间，批间可重复性变异系数为1.7%。应用该方法对68份鸡肉样品检测弯曲菌阳性率为95.6%（65/68），传统分离方法阳性率为89.5%（60/68），两种方法的阳性符合率为89.7%。本研究建立的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好、操作简单，大大缩短检测周期，可作为检测鸡肉样品中弯曲菌的手段，为鸡肉样品弯曲菌的流行病学调查研究提供新的工具。