产气荚膜梭菌α毒素突变体的表达及免疫保护力评价

• 作者: 印春生 姚文生 康凯 朱真 李启红 杜吉革 薛麒 陈小云
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: A型产气荚膜梭α毒素 突变 重组表达 毒力 抗原性
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 265-270,280
• 页数: 7页
• 分类号: S852.61|R535
• 字数: 4944字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.02.13

摘要

对已知的产气荚膜梭菌CPA编码基因进行优化设计,同时引入包括第56和130位的天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G),及第275位的酪氨酸(Y)和第336位的天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N)的4个氨基酸突变,经人工合成获得基因片段Gcpam4.将Gcpam4克隆至原核表达载体pET-30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白rCPAm4.利用Western blot方法检测rCPAm4与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清的反应性,并采用小鼠检测纯化蛋白的毒力.随后,将rCPAm4与Montanide ISA 201佐剂以1∶1的比例混合乳化制备疫苗,免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测兔血清的中和抗体效价.二免后21 d,对家兔通过耳缘静脉注射1个家兔MLD剂量的A型产气荚膜梭菌毒素,以检测rCPAm4对家兔的免疫保护效果.结果 表明,rCPAm4主要以包涵体的形式表达,且能与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清反应;小鼠安全性试验显示,5.5 mg/kg剂量的rCPAm4对小鼠仍无致死性;免疫rCPAm4后,每毫升的一免抗血清可中和10～20个小鼠MLD、二免抗血清可中和30～50个小鼠MLD的A型产气荚膜梭菌毒素;1个家兔MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔100％死亡,免疫组家兔得到了100％的保护.以上结果表明,rCPAm4具有良好的安全性和免疫原性,从而为A型产气荚膜梭菌基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈小云		25	144	6.0	11.0
2	李启红		41	106	5.0	8.0
3	姚文生		38	164	5.0	12.0
4	康凯		46	153	6.0	10.0
5	印春生		30	127	5.0	11.0
6	杜吉革		11	6	2.0	2.0
7	薛麒		15	17	3.0	3.0
8	朱真		13	7	2.0	2.0