表达Omp31基因重组牛布鲁菌的构建及鉴定

• 作者: 卜昭阳 屈海龙 杨艳玲 梁佳茗 王兴龙 王晓旭 王秀然 王莉 郎需龙 钱晶
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛布鲁菌 Omp31基因 重组细菌活载体 疫苗候选株
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 260-264
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61|R535
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.02.12

摘要

为提高布鲁菌疫苗株的免疫保护效果,本试验以牛布鲁菌疫苗株S19为研究对象,将羊布鲁菌Omp31基因克隆、扩增并插入至广宿主质粒pBBR1 MCS-2中,构建重组质粒pBBR1MCS-Omp31;通过电转化的方式转入S19感受态细胞中,经抗性基因筛选和PCR验证,获得重组牛布鲁菌S19-Omp31株;该重组菌株连续传25代未发现重组质粒和Omp31基因丢失,表明其遗传稳定性良好;进一步经SDS-PAGE检测可见约26 000相对分子质量的目的条带,采用Western blot法检测显示目的蛋白可与His单克隆抗体及Omp31蛋白高免血清反应.本研究构建的重组牛布鲁菌S19-Omp31株能够稳定表达目的基因,为进一步开展S19-Omp31株的免疫效果评价奠定基础.