甘露醇磷酸化酶基因的敲除对D-甘露醇合成的影响

• 作者: 何光明 李玉 瓮茹茹 石爱琴 赵雅童 路福平
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 基因敲除 甘露醇 甘露醇脱氢酶 NADH
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 118-124
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-1039

摘要

为了探究甘露醇分解利用途径对甘露醇合成的影响,在重组菌株R1(K-12/pTrc99a-mdh)的基础上,通过CRISPR/Cas9敲除E.coli PTS系统中的cmtA、cmtB、mtlA基因,阻断了E.coli K-12中甘露醇的分解途径,获得了重组菌株R3(K-12/△cmtA△cmtBmdh+)和R5(K-12/△cmtA△cmtB△mtlAmdh+).与出发菌株R1相比,R3的生长速率没有降低,而R5的生长速率明显下降.并且R5在以甘露醇为唯一碳源的培养基上已无法生长,说明cmtA、cmtB、mtlA三个基因全部敲除后,菌株已无法再利用甘露醇作为碳源进行生长.最后,构建的重组菌株R5,测得MDH酶活力为258 U/mL,用高效液相色谱对胞外产物进行检测,可检测到少量的甘露醇,为进一步探究大肠杆菌合成甘露醇的调控机制奠定基础.