猪miR-199a-3p对mTOR基因表达的调控

• 作者: 孙敬礼 李涛 邱梅玉 黄涛
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: miR-199a-3p mTOR基因 表达调控
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: Q343.1
• 字数: 3995字
• 语种: 中文

摘要

通过生物信息学预测miR-199a-3p与mTOR-3'UTR的结合位点,人工合成猪mTOR-3'UTR及突变型片段克隆至双荧光素酶载体上,构建野生型(psiCHECK-2-W-mTOR-3'-UTR)和突变型(psi-CHECK-2-M-mTOR-3'-UTR)双荧光素酶报告质粒.给PK-15细胞分别转染miR-199a-3p mimics、nega-tive control和mTOR-3'-UTR野生型/突变型双荧光素酶报告载体,用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,分别采用RT-qPCR和Western blot检测mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平.结果表明,将含mTOR-3'-UTR的野生型和突变型双荧光素酶报告质粒与miR-199a-3p mimic共转染PK-15细胞,野生型报告质粒表达的荧光素酶活性显著低于其阴性对照组(P<0.05);转染miR-199a-3p mimics能显著下调mTOR基因mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而转染miR-199a-3p Inhibitor组和Inhibitor-NC组相比,mTOR基因蛋白表达差异不显著(P>0.05).成功构建了猪野生型及突变型mTOR-3'-UTR双荧光素酶报告质粒,通过双荧光素酶试验、RT-qPCR及Western blot证实miR-199a-3p与猪mTOR-3'-UTR存在靶向调控关系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄涛	石河子大学动物科技学院	58	197	7.0	10.0
2	孙敬礼	石河子大学动物科技学院	20	66	5.0	6.0
3	邱梅玉	石河子大学动物科技学院	11	9	2.0	2.0