高表达hoxb4转基因斑马鱼胚胎定向造血阶段cdh5-mRNA的表达

• 作者: 何志旭 刘庆 吴西军 姚冬静 杨小燕 王一慧 王念雪 舒莉萍
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 原位杂交 胚胎 造血 发育 调控
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 1247-1253
• 页数: 7页
• 分类号: R318.1|Q132.4
• 字数: 4145字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.11.002

摘要

目的:探讨高表达hoxb4转基因系斑马鱼胚胎定向造血发育中cdh5-mRNA的表达.方法:实验分为野生型(WT)对照组、增强绿色荧光蛋白(EGFP)对照组及高表达hoxb4实验组斑马鱼胚胎,收取定向造血阶段32、36、40、44、48 hpf的胚胎各30枚;将pCS2-cdh5重组质粒进行单酶切,用T3 RNA体外转录体系转录得到地高辛标记的cdh5基因的反义mRNA片段,以其为探针对各组胚胎进行全胚胎原位杂交,显微镜下观察32、36、40、44、48 hpf的造血组织区域cdh5-mRNA杂交信号并拍照记录灰度值.结果:32、36 hpf时高表达hoxb4实验组斑马鱼胚胎造血组织AGM区、PBI区cdh5-mRNA的表达较EGFP对照组及WT对照组增高,差异均有统计学意义(P＜0.05),EGFP对照组与WT对照组差异无统计学意义(P＞0.05);40、44 hpf时高表达hoxb4实验组斑马鱼胚胎造血组织PBI区cdh5-mRNA的表达较EGFP对照组及WT对照组增高,差异均有统计学意义(P＜0.05),EGFP对照组与WT对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);48 hpf时3组斑马鱼胚胎在造血组织区域均未见cdh5-mRNA杂交信号.结论:在高表达hoxb4转基因斑马鱼胚胎中,cdh5-mRNA在定向造血阶段相应造血区域高表达.