抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器的制备与验证术

• 作者: 刘庆友 刘芳 张玮 李力 梁振鑫
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: erbB2原癌基因 嵌合抗体 转基因小鼠 乳腺生物反应器
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 40-51
• 页数: 12页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190806

摘要

目的:构建抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体并制备和验证抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器模型.方法:利用PCR法扩增出抗人p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的重链基因H和轻链基因L,然后分别将嵌合抗体重链基因H和嵌合抗体轻链基因L连接到乳腺特异性表达质粒pBC1,从而构建抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体pBC1-H和pBC1-L.分别将抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26乳腺特异表达载体pBC1-H和pBC1-L线性化,然后使用原核显微共注射法获得8只转基因FVB小鼠,通过鼠尾直接PCR鉴定其转基因阳性.通过RT-PCR、荧光定量PCR鉴定转基因小鼠乳腺组织中抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的mRNA表达.使用小鼠乳汁采集器收集其乳汁并通过Western blot和夹心ELISA等实验鉴定抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26是否获得表达.结果:经测序验证,抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的嵌合重链基因H和嵌合轻链基因L分别与乳腺特异表达质粒pBC1正确正向连接.鼠尾直接PCR结果显示所获8只转基因FVB小鼠均为转基因双阳性小鼠,且抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的重链基因H和轻链基因L在它们的后代中稳定遗传,它们的后代中转基因小鼠双阳性率约为30％;RT-PCR和荧光定量PCR的结果显示,转基因双阳性小鼠及其双阳性后代的乳腺组织中存在抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的mRNA表达;Western blot和ELISA等实验结果显示,转基因双阳性小鼠乳汁中存在抗p185eerbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的蛋白质表达,而且抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26与羊抗人K链抗体和羊抗人IgG Fc-HRP抗体均能特异性结合.结论:成功构建抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体pBC1-H和pBC1-L和制备了抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器模型,为今后抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因牛乳腺生物反应器的研究奠定了理论和技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘芳	广西大学动物科学技术学院	80	355	11.0	15.0
2	李力	广西医科大学附属肿瘤医院区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点室验室	377	1810	20.0	26.0
3	张玮	广西医科大学附属肿瘤医院区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点室验室	149	564	13.0	17.0
4	刘庆友	广西大学动物科学技术学院	54	200	7.0	11.0
5	梁振鑫	广西医科大学附属肿瘤医院区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点室验室	4	11	2.0	3.0