含F/2A序列的抗 P185erbB2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体的构建

• 作者: 刘芳 张玮 李力 王琪
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: erbB2 嵌合抗体 慢病毒载体 Furin/2A多肽 内部核糖体进入位点
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 119-125
• 分类号: R34-33
• 字数: 5735字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2012.02.009

摘要

目的 构建含 F/2A 序列的抗 P185erbB2 人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体,观察其在 293T 细胞中的表达.方法 用具有自我剪切能力的弗林蛋白酶(Furin)/口蹄疫病毒2A多肽(F/2A)连接人鼠嵌合抗体的重链和轻链,形成一个开放阅读框 (ORF),插入慢病毒表达载体pWPI,构建重组抗P185erbB2全长人鼠嵌合抗体表达载体pWPI/H-F2A-L.以已构建的慢病毒表达载体pWPI/H-IRES-L为对照质粒.应用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体 3 质粒系统共转染入 293T 细胞进行包装,测定病毒滴度.再感染 293T 细胞,荧光显微镜下观察 GFP 的表达和转染效率,RT-PCR、ELISA 方法分别检测嵌合抗体 mRNA和蛋白的表达.结果 经测序鉴定,pWPI/H-F2A-L与预期设计一致;pWPI/H-F2A-L组的病毒滴度为4.3×105 TU/ml,而pW-PI/H-IRES-L 组的病毒滴度为3.5×105 TU/ml;两组重组慢病毒的转染效率分别为 87.68%和 79.08%:两组重组慢病毒感染 293T 细胞后,都有嵌合重链和嵌合轻链的表达,由F/2A介导的嵌合抗体的表达水平要高于由 IRES 介导的嵌合抗体.结论 成功构建了含F/2A序列的抗P185erbB2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体,为今后抗P185erbB2工程抗体的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘芳		80	355	11.0	15.0
3	李力		377	1810	20.0	26.0
4	张玮		149	564	13.0	17.0
5	王琪		87	263	8.0	11.0