摘要:
目的 探究骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP4)和BMP-7对人牙周膜干细胞(human periodontalligament stem cells,hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响. 方法免疫磁珠法分离培养人PDLSCs,观察细胞生长情况,鉴定细胞表型(CD146、CD44和CD34)和多项分化潜能(成骨、成脂).将获得的PDLSCs分为BMP4处理组、BMP-7处理组、BMP-4+BMP-7处理组,分别进行浓度梯度实验(每组均加入浓度梯度为0,5,10,20,40 ng/ml的相应BMP培养基培养192 h)和时间梯度实验(每组加入浓度为40 ng/ml的对应BMP培养基,均以0,48,96,144,192 h的时间梯度进行培养),收集细胞.MTT法和碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测PDLSCs增殖和ALP活性,免疫化学染色分析成骨分化相关基因骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ,COL Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagen typeⅢ,COLⅢ)表达改变. 结果分离培养的PDLSCs高表达表面抗原CD146(93%)、CD44(91.2%),低表达CD34(1.8%),经成骨、成脂诱导后,分别形成红色矿化结节和橘红色颗粒状脂滴.BMP-4、BMP-7、BMP4 +BMP-7均可呈时间和剂量依赖方式促进PDLSCs增殖和ALP活性表达(P<0.05),且可增加成骨分化相关基因OCN、BSP、COL Ⅰ和COLⅢ表达(P<0.05).与BMP-4或BMP-7相比,BMP-4 +BMP-7联合作用时,PDLSCs增殖和ALP活性更强(P<0.05),然而OCN、BSP、COL Ⅰ和COLⅢ表达差异无统计学意义(P>0.05). 结论BMP4、BMP-7、BMP4 +BMP-7均可促进PDLSCs增殖和成骨分化,BMP4 +BMP-7联合作用时细胞增殖和ALP活性更强,具有协同作用.