E2F1转录因子对小鼠全层皮肤缺损创面中M2型巨噬细胞的调节机制

• 作者: 仪臻 吴敏 吴毅平 徐逸 曾宁 杨长春 王海平 肖辉 邓裴
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 创伤和损伤 伤口愈合 E2F1转录因子 过氧化物酶体增殖物激活受体 M2型巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 104-109
• 页数: 6页
• 字数: 5264字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2019.02.005

摘要

目的 探讨E2F1转录因子对小鼠全层皮肤缺损创面中M2型巨噬细胞的调节机制.方法 引进E2F1基因敲除杂合子C57BL/6小鼠、野生型C57BL/6小鼠,自行繁殖并于小鼠出生后2周通过PCR法鉴定出E2F1基因敲除纯合子小鼠和野生型小鼠.采用随机数字表法分别选取12只经鉴定后生长至6～8周龄的雄性E2F1基因敲除纯合子C57BL/6小鼠、野生型C57BL/6小鼠,设为E2F1基因敲除组与野生型组,在每只小鼠背部制成1个全层皮肤缺损创面.伤后2、7d,每组分别采用随机数字表法选取6只小鼠处死,切取创面组织,采用免疫荧光法观察CD68和CD206双阳性M2型巨噬细胞表达并计算CD206阳性细胞百分比,蛋白质印迹法检测CD206蛋白表达,实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测精氨酸酶1 mRNA表达.另取2组伤后7d创面组织标本,分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量RT-PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的蛋白和mRNA表达.前述实验均重复4次.另取野生型组小鼠伤后7d创面组织标本3个,采用免疫共沉淀法及蛋白质印迹法检测E2F1与PPAR-γ的关系,重复2次.对数据行非配对t检验. 结果 E2F1基因敲除纯合子C57BL/6小鼠和野生型C57BL/6小鼠PCR产物大小分别为227、172 bp,与所设计DNA片段大小一致.伤后2、7d,与野生型组比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD68和CD206双阳性M2型巨噬细胞较多;与野生型组的(0.129±0.017)％、(0.282±0.071)％比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD206阳性细胞百分比[(0.234±0.032)％、(0.584±0.023)％]明显增加(t=3.29、3.54,P＜0.05).伤后2、7d,与野生型组的0.43±0.06、0.97±0.08比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD206蛋白表达(1.00 ±0.23、1.63 ±0.26)明显增加(t=2.41、2.45,P＜0.05).伤后2、7d,与野生型组的0.163 ±0.026、0.108±0.017比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中精氨酸酶1 mRNA表达(0.482 ±0.105、0.195±0.031)明显增加(t=3.04、2.86,P＜0.05).伤后7d,与野生型组的0.20±0.04、0.20±0.04比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中PPAR-γ蛋白与mRNA表达(0.61±0.12、0.51 ±0.13)均明显增加(t=3.36、2.86,P＜0.05).伤后7d,野生型组小鼠创面组织检测显示,PPAR-γ对E2F1存在单向作用. 结论 E2F1转录因子通过抑制PPAR-γ的表达影响M2型巨噬细胞的极化,从而抑制小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程.