B型肉毒毒素单克隆抗体的制备和鉴定

• 作者: 于海威 刘栋琦 安健 张惟材 张秀娟 熊向华 薛冲 陈洋洋
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: B型肉毒毒素 抗体,单克隆 制备 鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 930-934
• 页数: 5页
• 分类号: R378.83|Q813.2
• 字数: 4700字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.12.008

摘要

目的 利用杂交瘤技术筛选抗B型肉毒毒素(BoNT/B)的鼠源单克隆抗体(mAb).方法 以BoNT/BHc蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选阳性细胞株经有限稀释法克隆化后,采用腹水诱生的方法制备抗体,通过亚型鉴定、SDS-PAGE、Western印迹以及非竞争ELISA等方法对抗体进行鉴定.结果 5只BALB/c小鼠免疫后尾血效价均达到1:64000,取其中效价最高的5号鼠制备杂交瘤,筛选到9株阳性细胞,经鉴定抗体重链有IgG1和IgG2b两种亚型,轻链均为κ型.腹水制备的1E9-H2抗体纯度>96％,以线性表位与抗原BoNT/BHc特异性结合,亲和力常数为6.7×10-9 mol/L.结论 筛选到1株高亲和力鼠源单克隆抗体,为BoNT/B中和抗体研发及检测方法建立提供了选择.