免提核酸的高通量DNA检测技术

• 作者: 赵亚玲 郑直
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: DNA检测 杂交捕获 高通量 核酸提取
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 881-886
• 页数: 6页
• 分类号: R331
• 字数: 3272字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2019.06.022

摘要

目的 介绍一种基于捕获的高通量DNA检测技术,无需核酸提取,适用于不同样品的各种应用,以提供遗传分析有力的技术手段.方法 全血、唾液、干血斑和口腔拭子等样品裂解后释放DNA,经热变性后,通过与一系列特异探针杂交使靶DNA被捕获至96孔板;洗去未结合探针后,直接利用特异性引物进行荧光定量扩增(qPCR),或用酶连接连续排列的杂交探针,形成两端为特定序列的单链DNA模板,最后用通用引物进行qPCR分析;以全血中P16基因为靶标评估免提核酸技术的DNA检测效果,并将其应用于全血、血清及干血片样品中寄生虫DNA的检测,评估其灵敏度和特异性,同时评估了不同储藏方法下唾液及口腔拭子DNA检测的稳定性.结果 成功应用于全血、干血斑、唾液、口腔拭子等多种样品的DNA检测;无需核酸提取,唾液及拭子样品在室温及4℃下保存15 d后检测仍具有较高的稳定性;该方法对疟原虫的检测下限低至0.06个疟原虫/μL,较传统镜检具有更高的灵敏度,可准确检测到被感染样品中的寄生虫DNA.结论 建立了无需核酸提取的高通量DNA检测技术,适用于不同样本类型及靶标检测,为大规模基因筛查分析提供一个灵敏、高效的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑直	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系	11	11	2.0	3.0
2	赵亚玲	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系	2	0	0.0	0.0