一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价

• 作者: 华进 戴起宝 朱广伟 林春霖 程志彬
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 磷酸钙转染 293T细胞 肿瘤坏死因子受体相关因子6 flag蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 1177-1181,前插5
• 页数: 6页
• 分类号: Q819
• 字数: 3307字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190535

摘要

目的:探讨2种磷酸钙转染法转染293 T细胞的效果,建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293 T细胞的方法.方法:荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法(传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法)转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率.采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)mRNA和flag蛋白表达水平.结果:荧光显微镜下观察,与传统磷酸钙转染法比较,改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后的转染效率明显升高(P<0.01);Real-time PCR法和Western blotting法检测,与传统转染方法比较,磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后,TRAF6 mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高(P<0.01).结论:本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DNA转染方法.