构建重组枯草芽孢杆菌催化制备D-对羟基苯甘氨酸

• 作者: 刘露 李法彬 杜燕 班睿
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 枯草芽孢杆菌 D-海因酶 D-氨甲酰水解酶 表达质粒 D-对羟基苯甘氨酸
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 75-86
• 页数: 12页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190310

摘要

目的:在Bacillus subtilis中表达异源D-海因酶基因(hyd)和D-氨甲酰水解酶基因(adc),构建重组细胞作为催化剂,用于生产D-对羟基苯甘氨酸(D-HPG).方法:构建hyd表达质粒,考察培养基中二价金属离子对D-海因酶活性的影响.过表达acoR基因,考察AcoR蛋白胞内水平与PacoA-hyd基因拷贝数的关系.筛选表达adc基因的启动子,构建hyd和adc基因共表达质粒,考察双酶活性菌株的催化特性.结果:成功构建了海因酶表达质粒pHPS和pUBS,培养基中添加0.8mmol/L的MnCl2·4H2O,使168N/pUBS菌株的D-海因酶活性达到956U/gDCW.整合表达Pcdd-acoR基因,使LSL02/pUBS菌株的D-海因酶活性达到1 470U/gDCW.单拷贝PAE-adc基因的表达水平相对最高.双酶共表达质粒pUBSC被成功构建,菌株LSLO2/pUBSC的最适催化温度为40℃～45℃,催化活性能够持续12h,当底物起始浓度为20g/L时,反应12h生成的D-HPG达到14.32g/L,转化率达到95％,收率超过80％.结论:构建具有D-海因酶和D-氨甲酰水解酶双酶活性的重组Bacillus subtilis作为全细胞催化剂,用于海因酶法生产D-HPG,具有技术上的可行性和优势.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	班睿	天津大学化工学院天津大学系统生物工程教育部重点实验室	29	408	10.0	19.0
2	刘露	天津大学化工学院天津大学系统生物工程教育部重点实验室	6	35	2.0	5.0
3	杜燕	天津大学化工学院天津大学系统生物工程教育部重点实验室	3	4	2.0	2.0
4	李法彬	天津大学化工学院天津大学系统生物工程教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0