DWORF序列增强GFP荧光强度

• 作者: 刘立会 廉虹 王金金 聂宇
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 荧光蛋白质 DWORF基因 Kozak序列
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 749-756
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.07.08

摘要

荧光蛋白质是重要且常用的标签蛋白质,但是在没有强启动子的情况下表达量低,会影响检测的灵敏度.DWORF(dwarf open reading frame)是由NONMMUG026737编码的长度为34个氨基酸的短肽,其mRNA 5'端能够启动下游基因表达.Kozak序列是现今唯一一个位于成熟mRNA 5'端的增强子,能够提高基因在蛋白质水平的表达,但对某些基因在蛋白质水平的表达增强效果不理想.为了检测DWORF mRNA 5'端(命名为DW)是否能够通过提高荧光蛋白质基因在蛋白质水平的表达,从而增强荧光强度,我们设计了如下实验:将DWORF mRNA 5'端与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)构建到表达载体中(命名为DW-GFP),转染细胞后检测荧光强度,发现与对照组相比,转染DW-GFP质粒的细胞荧光强度显著提高(56.82±1.77 vs.45.97±0.44,P＜0.05).为了便于后续应用,将DW截短到18个碱基(命名为DW18),仍能显著提高GFP的荧光强度(33.57±1.11 vs.25.34±0.98,P＜0.05),且比Kozak序列提高6.80％.同时,我们发现DW18与Kozak序列同时存在能够进一步提高GFP的荧光强度,比Kozak序列单独存在时提高13.58％.本研究证明DWORF序列及其截短形式(DW18)能够有效提高表达效率,为研究低丰度蛋白质的生物学功能提供了可能的方法和工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廉虹		6	8	1.0	2.0
2	聂宇		9	0	0.0	0.0
3	刘立会		1	0	0.0	0.0
4	王金金		1	0	0.0	0.0