摘要:
目的 观察米诺环素对H9c2心肌细胞氧糖剥夺( OGD)/复氧复糖( R)损伤的保护作用,并研究其作用机制是否与抗凋亡有关.方法 用减少氧气和糖的供给造成急性心肌细胞缺氧缺糖,然后在预定时间内恢复氧及正常含糖培养基供应的方法建立OGD/R模型.将心肌H9c2细胞分为正常组(常规培养不加干预)、模型组(OGD 6 h/1 h,OGD 6 h/6 h,OGD 6 h/12 h)和低、中、高浓度实验组(OGD/R+1,10和50 μmol·L-1米诺环素).用台盼蓝和噻唑蓝法检测不同浓度米诺环素和不同时间点复氧对H9c2细胞OGD/R损伤诱导的细胞死亡率或存活率的影响.用Western blotting法检测米诺环素对凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase 3、Bax、Bcl-2、JNK及p-JNK的影响.结果 在OGD 6 h/R 6 h条件下,模型组细胞死亡率为(30.11 ± 6.16)% ,与正常组(1.23% )和中浓度实验组(9.33 ± 2.01)%比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).在OGD 6 h/R 6 h条件下,正常组、模型组和中、高浓度实验组细胞 OD 值分别为0.35 ± 0.01, 0.23 ± 0.02,0.27 ± 0.02和0.28 ± 0.03;在OGD 6 h/R 12 h条件下,正常组、模型组和高浓度实验组细胞OD值分别为0.37 ± 0.01,0.27 ± 0.02和0.32 ± 0.02, 2个模型组分别与相应的正常组和中或高浓度实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).在OGD 6 h/R 6 h条件下,正常组、模型组和低、中、高浓度实验组的Cleaved Caspase -3 蛋白相对表达量分别为0.83 ± 0.03,1.65 ± 0.24, 1.47 ± 0.09,1.29 ± 0.17和0.88 ± 0.16,p-JNK和JNK蛋白相对表达量的比值分别为0.45 ± 0.06,0.84 ± 0.06,0.75 ± 0.05,0.58 ± 0.07和0.37 ± 0.05,模型组的上述指标与正常组和低、中、高浓度实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05,P<0.01).在OGD 6 h/R 6 h条件下,正常组、模型组和高浓度实验组的Bax和Bcl -2 蛋白相对表达量的比值分别为0.52 ± 0.10,1.00 ± 0.13 和0.72 ± 0.18,模型组的上述指标与正常组和高浓度实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 米诺环素对H9c2细胞OGD/R损伤有保护作用,其保护机制与调节凋亡相关蛋白的表达从而抑制凋亡有关.