Loop EF区嵌合猪细小病毒B细胞表位对猪圆环病毒2型病毒样颗粒组装的影响

• 作者: 张素姣 李萌 湛洋 王东亮 王乃东 蒋一凡
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 病毒样颗粒 外源表位 突变体蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 176-182
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0024

摘要

Loop EF是猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白的重要Loop结构,然而它在PCV2组装过程中的作用仍不清楚.本研究通过模拟PCV2病毒样颗粒(VLPs) 3D结构,比较分析PCV2和PCV1、PCV3的氨基酸序列以及预测Loop EF的突变位点,筛选出PCV2 Loop EF中可供外源表位替换或插入的capsid表面位点,即第133位丙氨酸.探索性地针对该位点设计3个突变体,分别为猪细小病毒1型(PPV1)B细胞线性表位(228QQITDA233)插入PCV2 Cap第132和133位氨基酸、第133和134位氨基酸之间及替换第133位氨基酸.利用over-lap PCR等技术构建上述3个突变体的重组质粒,在大肠杆菌(BL21/DE3)中表达,并利用镍柱亲和层析纯化3个突变体蛋白,最后在体外进行VLPs组装,电镜结果显示3个突变体蛋白均可体外组装成完整的VLPs.结果 表明,Loop EF中第133位丙氨酸的替换或插入外源表位突变不影响VLPs组装,提示PCV2 VLPs Loop EF展示外源抗原表位具有可行性.