MDCK悬浮细胞制备及流感病毒敏感性研究

• 作者: 乔自林 张雪梅 李倬 李自良 李莉 王家敏 王美皓 赵彩红 靳冬武 马忠仁
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: MDCK细胞 无血清 悬浮驯化 流感病毒 禽流感病毒
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 981-988
• 页数: 8页
• 分类号: R373.1
• 字数: 4227字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.172

摘要

目的 建立无血清悬浮培养MDCK细胞的方法,分析其传代、线性放大过程中的稳定性及增殖流感病毒的敏感性.方法 运用逐步降血清悬浮驯化法将贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞;进一步分析其生长动力学特性、连续传代稳定性,在5L生物反应器中扩大培养;接种流感和禽流感病毒,测定不同时间HA效价、CCID50滴度,分析其病毒敏感性.结果 成功将ATCC引进的贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞(命名为MDCK-XF02细胞)并冻存;不同接种密度培养MDCK-XF02细胞最大增殖密度均达13.0×106 cells/mL以上,且差异无统计学意义(P＞0.05);连续传代培养过程中细胞形态和生长状况稳定,比生长速率差异无统计学意义(P＞0.05);三个代次的MDCK-XF02细胞以2.0×106 cells/mL接种于5L生物反应器,细胞生长状态良好,倍增时间小于21 h,在批培养中细胞浓度高达(14.57±0.47)×106 cells/mL,比生长速率分别为(0.027±0.012)h-1、(0.028±0.013)h-1、(0.027±0.013)h-1 (p＞0.05);接种甲型流感病毒H1N1和H3N2,HA效价达到(6～7)log2 HA/25μL、CCID50为(4.35～4.68) lgCCID50/mL;接种乙型流感病毒B/P和BX-35增殖效果更好,HA效价达到(9～10)log2 HA/25 μL,CCID50为(6.38～7.31) lgCCID50/mL.接种重组禽流感病毒H5亚型Re-5、Re-6、Re-10均能很好的增殖,HA效价达到(7～9)log2 HA/25μL、CCID50为(6.21～6.96)lgCCID50/mL.结论 本研究获得一株具有自主知识产权的流感/禽流感病毒敏感的无血清悬浮培养型MDCK-XF02细胞株,实现了生物反应器高密度放大培养,为我国开展流感疫苗研究和生产提供细胞基质,也为其他动物细胞悬浮驯化提供参考.