三种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证

• 作者: 崔冬冰 张鹏 舒莉萍 范安然
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 淀粉样前体蛋白 胞外结构域 突变体 信号肽 神经退行性疾病
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 626-631
• 页数: 6页
• 分类号: R741.02
• 字数: 4056字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.06.002

摘要

目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证.方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的片段连接于pCMV-APP695载体中得到APP胞外结构域突变体质粒;质粒转染CHO细胞后,添加G418筛选表达APP胞外结构域突变体的单克隆细胞系;通过Westernblot方法检测APP胞外结构域突变体的表达及胞外分泌水平,分析信号肽对该突变体分泌的影响.结果:成功获得了APP的E1结构域突变体、E1/信号肽双缺失突变体以及E2结构域突变体细胞株,且APP突变体可以正常表达和分泌,但是信号肽缺失后APP突变体可以表达、而不能分泌.结论:APP的E1和E2结构域对APP蛋白的胞外分泌无影响.