miR-325通过调控TFRC抑制胶质瘤细胞恶性生物学特征的实验研究

• 作者: 刘沛东 张一鸣 张亮 张锦浩 易立 李佳博 杨学军 王旭亚 童鹿青 解杨
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 关键词: miR-325 转铁蛋白受体 神经胶质瘤 U87细胞 U251细胞
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 神经胶质瘤
• 页码范围: 885-895
• 页数: 11页
• 字数: 8228字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2019.09.003

摘要

目的 研究miR-325通过调控转铁蛋白受体(TFRC)基因在胶质瘤细胞中的表达对胶质瘤细胞进程的影响和分子机理.方法 (1)收集天津医科大学总医院神经外科自2015年1月至2018年1月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤标本35例,以患者癌旁正常组织作为对照.反转录-定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肿瘤组织和癌旁组织miR-325、TFRC mRNA的表达,比较不同临床特征患者肿瘤组织miR-325的表达及miR-325低表达、 高表达患者的生存曲线.(2)RT-qPCR检测体外培养的HA、U251和U87细胞miR-325的表达;荧光素酶活性实验检测U251和U87细胞miR-325与靶基因TFRC的调控关系;将U251、U87细胞分为miR-325模拟物组、无义序列组,分别转染miR-325模拟物和无义序列,48 h后分别应用RT-qPCR、Western blotting检测细胞TFRC mRNA和蛋白的表达;将U251、U87细胞分为对照小干扰RNA(siRNA)+无义抑制物组、TFRC干扰RNA(siTFRC)+无义抑制物组、siTFRC+miR-325抑制物组,分别转染对应物质后48 h应用Western blotting检测细胞TFRC蛋白的表达.CCK-8实验检测细胞的增殖,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力;将U251、U87细胞分为pcDNA3.1空载体+无义序列组、TFRC pcDNA3.1+无义序列组、TFRC pcDNA3.1+miR-325模拟物组,分别转染对应物质后48 h应用Western blotting检测细胞TFRC蛋白的表达,CCK-8实验检测细胞的增殖,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果 (1)与癌旁组织比较,患者肿瘤组织miR-325的表达下降,TFRC mRNA的表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤组织TFRC mRNA、miR-325的表达呈负相关关系(r=-0.363,P=0.001).与Karnofsky功能状态评分≥80分患者比较,<80分患者肿瘤组织miR-325的表达降低;与WHO分级Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤比较,Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织miR-325的表达降低;差异均有统计学意义(P<0.05).miR-325低表达患者的生存率低于miR-325高表达患者,差异有统计学意义(P<0.05).(2)与HA细胞比较,U87、U251细胞miR-325的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);在TFRC野生型(WT)表达载体转染的细胞中,miR-325模拟物组细胞荧光素酶活性低于无义序列组,而miR-325抑制物组细胞荧光素酶活性高于无义抑制物组,差异有统计学意义(P<0.05);与无义序列组比较,miR-325模拟物组U87和U251细胞TFRC mRNA和蛋白的表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05).与对照siRNA+无义抑制物组比较,siTFRC+无义抑制物组细胞TFRC蛋白的表达、吸光度值、侵袭细胞数降低;与siTFRC+无义抑制物组比较,siTFRC+miR-325抑制物组细胞TFRC蛋白的表达、吸光度值、侵袭细胞数增高,差异均有统计学意义(P<0.05).与pcDNA3.1空载体+无义序列组比较,TFRC pcDNA3.1+无义序列组细胞TFRC蛋白的表达、吸光度值、侵袭细胞数升高;与TFRC pcDNA3.1+无义序列组比较,TFRC pcDNA3.1+miR-325模拟物组细胞中TFRC蛋白的表达、吸光度值、侵袭细胞数降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-325在胶质瘤细胞中表达下调并且具有抑癌作用,miR-325低表达患者预后较差.miR-325通过抑制靶基因TFRC的表达抑制癌细胞进展.