抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用

• 作者: 唐泽群 张瑞莉 罗海燕 葛铭 许丹蕾 郭荣
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: chTLR3 单克隆抗体 Western blot 间接免疫荧光 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1292-1300
• 页数: 9页
• 分类号: Q813
• 字数: 6576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.06.020

摘要

Toll样受体3(TLR3)是激发机体天然免疫的模式识别受体,为了制备能与天然结构的鸡TLR3 (chTLR3)蛋白结合的单克隆抗体,将前期构建的可以在细胞内表达的真核重组质粒pVAX1-Igk-chTLR3免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗chTLR3单克隆抗体;并应用该抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术检测镉中毒雏鸡外周血淋巴细胞与脾内chTLR3的表达变化.结果 发现,获得1株阳性杂交瘤细胞,该细胞株单个细胞染色体数量为(94±2)条,细胞上清效价为1∶25,抗体亚类鉴定为IgG3,细胞上清能够与原核表达的chTLR3胞外区蛋白及鸡外周血淋巴细胞中的chTLR3特异性结合.应用此抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术均能够在对照组和染镉组雏鸡外周血淋巴细胞及脾内检测到chTLR3的蛋白表达.结果 表明,成功制备了具有天然活性的chTLR3单克隆抗体,该抗体可用于Western blot、间接免疫荧光技术及流式细胞术研究chTLR3在鸡组织细胞的分布定位、表达变化,为示踪chTLR3蛋白分布、表达及研究其在鸡发病机制中的作用提供了重要的物质基础.