无乳链球菌通过抑制酪氨酸激酶／信号转导及转录激活因子和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路影响奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的合成

• 作者: 孙铭维 张华 张婕 杨德莲 熊本海 童津津 蒋林树
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 无乳链球菌 奶牛乳腺上皮细胞 乳蛋白合成 信号通路
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 分子营养
• 页码范围: 3706-3718
• 页数: 13页
• 分类号: S811.3
• 字数: 6175字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006?267x.2019.08.032

摘要

本试验旨在研究无乳链球菌( GBS)对奶牛乳腺上皮细胞( BMECs)乳蛋白合成的影响机理.试验用不同浓度GBS[感染复数( MOI)分别为100、50、10]感染BMECs 1、2、4、6、8、12、18、24 h,每个时间点都设立相应的空白对照,采用乳酸脱氢酶( LDH)试剂盒、扫描电镜以及流式细胞术等方法检测GBS对BMECs活性、形态及凋亡的影响;采用反转录－聚合酶链式反应( RT?PCR)和Western blot检测β－酪蛋白及乳蛋白合成相关基因的mRNA和蛋白表达量.结果表明:1) GBS对BMECs的毒性作用具有明显的时间、剂量依赖性,即随着感染时间的延长、细菌浓度的升高,LDH释放量显著或极显著高于对照组( P＜0.05或P＜0.01) ;GBS感染后细胞形态发生显著变化,感染6h时,细胞结构断裂,感染8h时,细胞形态结构受到严重破坏;感染2h时,BMECs发生了显著的凋亡( P＜0.05) ;感染6 h时,BMECs发生极显著的凋亡( P＜0.01) . 2)感染6 h时,GBS导致BMECs中β－酪蛋白以及正调控乳蛋白表达基因酪氨酸激酶2( JAK2)、信号转换及转录激活因子5a( STAT5a) 、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR) 、丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶1( AKT1) 、核糖体蛋白 S6 ( sRPS6 ) 、催乳素受体( PRLR) 、 est 结构域转录因子5 ( ELF5 ) mRNA表达量极显著下降( P＜0.01);负调控基因真核翻译起始因子 4E 结合蛋白 1 ( EIF4E?BP1) mRNA表达量极显著上升( P＜0.01) ;GBS导致BMECs中β－酪蛋白、STAT5a、磷酸化－信号转导及转录激活因子5a( p?STAT5a) 、mTOR、磷酸化－哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( p?mTOR) 、AKT1蛋白表达量极显著下降( P＜0.01),而磷酸化－丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶1( p?AKT1)蛋白表达完全受到抑制.在感染8 h 时, GBS 完全抑制了 β－酪蛋白、STAT5a、p?STAT5a、 mTOR、p?mTOR、AKT1、p?AKT1的蛋白表达.由此可见,GBS能够损伤BMECs的形态结构,促进细胞凋亡,降低细胞活性,从而影响细胞的正常生理功能,此外,GBS抑制BMECs乳蛋白的合成,主要通过抑制JAK／STAT、mTOR信号通路发挥作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊本海	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	151	1105	19.0	28.0
2	杨德莲	奶牛营养学北京市重点实验室北京农学院动物科技学院	2	6	1.0	2.0
3	童津津	奶牛营养学北京市重点实验室北京农学院动物科技学院	4	8	2.0	2.0
4	孙铭维	奶牛营养学北京市重点实验室北京农学院动物科技学院	2	6	1.0	2.0
5	张婕	奶牛营养学北京市重点实验室北京农学院动物科技学院	2	6	1.0	2.0
6	张华	奶牛营养学北京市重点实验室北京农学院动物科技学院	3	8	2.0	2.0