禽流感病毒HA蛋白的原核表达与鉴定

• 作者: 侯力嘉 吴胜昔 徐缘 曾政 李令臣 李俊萱 李志 梁望旺 鲁友铭
• 来源期刊: 重庆理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 血凝素蛋白 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 药学·医学
• 页码范围: 137-141
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4
• 字数: 2945字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8425(z).2019.05.022

摘要

为了实现禽流感病毒血凝素(HA)蛋白在原核系统中高效表达,根据Gen Bank发表的HA(ID=DQ023145.1)基因序列,在不改变HA蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,化学合成HA全基因.将其克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)-HA,转化至BL21工程菌进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化HA重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定.结果 表明:当重组菌株pET28a(+)-HA/BL21 (DE3)诱导条件为30℃、IPTG浓度为1 mmol/L诱导8h时,HA蛋白表达量最高;SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后HA蛋白纯度较高,Western blot实验发现在预期的70 kD处有明显的蛋白印迹条带,说明已成功实现了在大肠杆菌中高效表达禽流感病毒HA蛋白,为后续开展禽流感检测方法及疫苗的研究奠定了基础.