宫颈癌细胞通过下调miR-301b表达促进基因组DNA损伤修复

• 作者: 杨磊 穆红 谢莉丽
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 宫颈癌 miR-301b C末端结合蛋白作用蛋白 DNA损伤修复
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 1286-1292
• 页数: 7页
• 分类号: R737.3
• 字数: 5921字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2019.11.002

摘要

目的 通过研究miR-301b、C末端结合蛋白作用蛋白(Ctip)基因表达在DNA损伤修复过程中的作用以及miR-301b影响Ctip基因表达的作用机制,揭示宫颈癌细胞修复DNA损伤的新机制.方法 (1)Siha细胞经肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理、miR-301b模拟物、抑制物转染以及pcDNA3.1/Ctip与miR-301b模拟物共转染后,利用流式细胞术检测平台和彗星实验测定细胞内DNA损伤标志物γ-H2AX蛋白平均表达水平和DNA彗星状尾距;(2)采用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测DNA损伤修复过程中细胞内miR-301b、CtipmRNA的水平以及转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内Ctip mRNA的水平;(3)采用Western-blot蛋白印迹试验检测转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内Ctip蛋白的水平;(4)应用生物信息学预测miR-301b在Ctip mRNA上的靶定位点;(5)应用荧光报告实验检测转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内mRNA上存在miR-301b靶定位点的报告基因的表达水平.结果 (1)与对照相比,刺激1.5和3h后,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)使细胞内γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距升高,刺激6h后,TNF-α对胞内γ-H2AX蛋白平均水平以及DNA平均尾距无影响;转染miR-301b模拟物升高γ-H2AX蛋白平均水平和DNA尾距,转染miR-301b抑制物降低γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距;与miR-301b模拟物共转染的pcDNA3.1/Ctip降低细胞内γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距;(2) TNF-α刺激使细胞内miR-301b水平降低,CtipmRNA水平升高;转染miR-301b模拟物降低Ctip mRNA水平,转染miR-301b抑制物升高Ctip mRNA水平;(3)转染miR-301b模拟物降低Ctip蛋白水平,转染miR-301b抑制物升高Ctip蛋白水平;(4)miR-301b靶定Ctip mRNA的3208至3214核苷酸位点;(5)mRNA上存在miR-301b靶定位点的报告基因的表达水平在miR-301b模拟物转染后降低,在miR-301b抑制物转染后升高.结论 Siha细胞通过下调miR-301b表达增强Ctip基因表达促进基因组DNA的损伤修复.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	穆红	天津市第一中心医院检验科	88	436	13.0	16.0
2	杨磊	天津市第一中心医院检验科	13	4	1.0	2.0
3	谢莉丽	天津市第一中心医院检验科	1	0	0.0	0.0