甘蔗花叶病毒辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备

• 作者: 于伟鹏 何梦君 李向东 杨广玲 杨旭 许小洁 韩士玲
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蔗花叶病毒 辅助成分-蛋白酶 原核表达 抗血清 检测
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 植物保护·农业气象
• 页码范围: 87-91
• 页数: 5页
• 分类号: S435.131.4
• 字数: 3693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.14083/j.issn.1001-4942.2019.03.018

摘要

利用RT-PCR克隆甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)DWK1分离物辅助成分-蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)基因,酶切后连接原核表达载体pEHISTEV,得到重组质粒pE-HISTEV-SCMV-HC-Pro.将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,经IPTG诱导后,表达出57 kD的融合蛋白.切胶回收融合蛋白,多点注射法免疫新西兰长耳兔,制备SCMV HC-Pro抗血清.间接ELISA结果表明,该血清效价为1:8192.感染DWK1的玉米叶片病汁液稀释128倍时,该血清仍然能够有效检测出HC-Pro.Western-blot检测结果表明,该血清可特异性检测SCMV第Ⅰ组分离物DWK1和第Ⅳ组分离物DWK2,与同属的烟草脉带花叶病毒(TVBMV)和马铃薯Y病毒(PVY)均无反应.本研究为准确、快速检测SCMV HC-Pro并进一步研究其功能和作用机制奠定了基础.